Passo 1: Dissolva o peptídeo Melanotan I bruto em 100 mL de água purificada e filtre a mistura através de uma membrana de 0,45 μm para obter uma solução peptídica bruta.
Etapa 2: purificar o peptídeo Melanotan I bruto usando cromatografia líquida de alto-desempenho (HPLC). Utilize uma coluna de compressão axial dinâmica DAC-HB50 com um processo de eluição gradiente, empregando Fase Móvel A (0,05% em peso de ácido trifluoroacético em água) e Fase Móvel B (0,05% em peso de ácido trifluoroacético em acetonitrila). Monitore a amostra usando um detector UV e colete a solução peptídica correspondente ao pico alvo em frações.
Etapa 3: Após a purificação por HPLC, obter 180 mL de solução de trifluoroacetato de Melanotan I com pureza superior a 99%; concentre-o por meio de evaporação rotativa para produzir 50 mL de solução.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99% de pureza). Eluir durante 50 minutos utilizando um sistema aquoso de ácido acético a 2%. Concentre o produto alvo coletado em 80 mL por meio de evaporação rotativa e, em seguida, submeta-o a processos de pré-liofilização e liofilização. Finalmente, obtenha 5,33 g de peptídeo Melanotan I de alta-pureza, representando um rendimento de 32,33%.